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谷胱甘肽测试方法

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  谷胱甘肽的检测方法很多,常用的方法有碘量法,DTNB(Ellman试剂)法,硝基铁氰化钠法,荧光法,四氧嘧啶法和液相色谱法(HPLC)。 以上方法各有优点,检测谷胱甘肽含量时,可以根据实际情况选择合适,灵敏,准确的检测方法。

  谷胱甘肽的检测方法很多,常用的方法有碘量法,DTNB(Ellman试剂)法,硝基铁氰 化钠法,荧光法,四氧嘧啶法和液相色谱法(HPLC)。 以上方法各有优点,检测谷胱甘肽含量时,可以根据实际情况选择合适,灵敏,准确的检测方法。

  DTNB比色法

  原理:DTNB与谷胱甘肽的巯基反应生成黄色的5-硫-2-硝基 苯甲酸,在412 nm波长处有一个较大吸收峰,而DTNB在400 nm以上几乎没有吸收峰,向含有谷胱甘肽的样品中加入少量DTNB,测量反应溶液在412 nm处的吸光度,并根据吸光度获得谷胱甘肽含量。

  方法步骤:

  1. DTNB存储溶液的制备:将0.01 mol / L DTNB溶解在0.05 mol / Lmile体育官网盐缓冲液(pH 7.0)中以形成DTNB存储溶液。

  2. DTNB分析溶液的制备:用0.5 mol / L,pH8.0 Tris-HCl缓冲溶液稀释DTNB储备溶液100倍,制备DTNB分析溶液,在黑暗中保存,准备用于当前使用。

  3.操作步骤:取0.5 mL谷胱甘肽标准溶液或测试样品溶液(0.1〜3.0 mol / L),将其加入1.5 mL浓度为0.15 mol / L的NaOH溶液中,然后加入3%甲醛, 溶液为05mL,并在pH 8.0和25℃下反应2分钟,反应后,将0.5mL反应溶液加入到DTNB分析溶液中,在25℃下反应5分钟,并在412nm的波长处测量吸光度,根据两者的吸光度,计算出差异并代入标准曲线以计算谷胱甘肽含量。

  碘量分析

  原理:利用谷胱甘肽的还原性与碘酸钾反应,当谷胱甘肽完全反应时,碘酸钾会将碘化钾氧化为碘,碘会使淀粉指示剂变蓝,这是滴定的终点。